“一带一路”国际生猪产业大会会议笔记5 | 孔苗苗:非洲猪瘟弱毒株精准剔除的关键点

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作者：微信文章


2025年8月14-16日，第二届“一带一路”国际生猪产业大会暨猪健康创新峰会将在中国郑州盛大举行。本次峰会由河南农业大学、欧洲猪健康管理学院（ECPHM）及行业领袖牧原食品股份有限公司联合主办，汇聚了全球顶尖的专家学者与行业领袖。

大会聚焦生猪健康领域的前沿科技与创新实践，与会专家们将围绕PRRS净化、非洲猪瘟防控、人工智能在猪场的应用及精准繁殖技术等关键议题，分享最新的研究成果与宝贵经验，共同推动产业的协同发展。

为将这份宝贵的行业智慧传递给更多同仁，冠牧精准诊断团队特将大会的精华内容梳理提炼。我们将通过“冠牧精准诊断”公众号，陆续与您分享本次大会的学习笔记，希望能与您共同学习，携手进步。敬请持续关注！



会议笔记（一）

报告人：曲东帅，丹俄国际

报告主题：猪群圆环和肺炎支原体控制案例报告

会议笔记（二）

报告人：Heiko Nathues教授，苏黎世兽医学院

报告主题：欧洲PRRS净化的经验教训和关键技术

会议笔记（三）

报告人：于林洋，河南农业大学

报告主题：我国猪源盖塔病毒的首次发现与流行现状

会议笔记（四）

报告人：宋春城，环山集团

报告主题：返饲操作在新生仔猪腹泻防控中的应用

2018年，非洲猪瘟（ASF）首次传入我国，给养猪业带来了巨大冲击。数年间，病毒不断演变，从最初的强毒株，到如今基因缺失株、自然弱毒株及重组毒株等多种毒株并存，其防控形势日益复杂。河南新航道食品有限公司的孔苗苗女士，基于其所在机构的一线实践与深入研究，系统分享了当前形势下，针对非洲猪瘟弱毒株进行精准检测的核心要点与挑战。本次分享聚焦于“检测过程质量管理”、“检测试剂盒的敏感性”和“样品类型的选择”三大关键环节，为行业提供了极具价值的参考。



孔苗苗，兽医硕士，2016年毕业于中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，毕业后加入河南新航道食品有限公司，从事兽医工作，参与猪群健康管理与疫病防控。非洲猪瘟来临后，带领团队组建新航道实验室并担任实验室主任至今，熟练掌握动物病原检测、血清学检测等技术方法。



一、 病毒演变：从“易于诊断”到“防控升级”

讲者首先回顾了非洲猪瘟病毒在国内的演变历程。2018-2019年，流行的主要是毒力强、致死率高的典型强毒株，临床症状明显，诊断相对容易。然而，从2019年到2021年，基因缺失株和自然变异株开始流行，其特点是临床表现趋于隐匿，潜伏期延长，并存在间歇性排毒，这使得诊断难度显著加大。2021年至今，自然弱毒株和重组毒株（如G1和G2型）的出现，进一步导致了母猪繁殖障碍、死淘率升高和隐性传播等复杂问题，使得qPCR检测面临挑战，防控难度全面升级。讲者强调，随着病毒与宿主的不断适应，未来将有更多弱毒株出现，养猪业将长期面临多类型毒株共存的困扰。



在病毒感染机制方面，ASFV的自然感染潜伏期为4-19天，值得注意的是，动物在出现临床症状的前两天便已开始大量排毒。病毒的散播情况因毒株毒力而异。通常在感染后约7-9天，猪只血清中的抗体转为阳性，且该抗体可能终身持续。因此，病原学检测阳性表明动物正在发生感染，而抗体检测阳性则表明感染正在或已经发生，后者也包括已康复的动物。



二、 新需求：高敏试剂盒与辅助诊断手段

面对弱毒株带来的“排毒滴度低”、“间歇排毒”和“隐性传播”三大新挑战，传统的疫情防控手段面临严峻考验。讲者指出，仅依靠普通灵敏度的试剂盒容易造成漏检，不利于疫情的早期发现。因此，行业对检测技术提出了新需求：一是需要更敏感、特异性更高的检测试剂盒；二是对于低致病力毒株的感染，抗体检测可以作为确诊的重要辅助手段，以应对病原检测可能出现的假阴性。



三、 弱毒株检测的三大关键点

讲者将弱毒株的检测核心归纳为三个关键点，并进行了详细阐述。



1. 检测过程的质量管理：人是核心，体系是保障

实验室检测是一个系统工程，其质量管理贯穿于“人、机、料、法、环、测”六大要素中。讲者强调，检测人员（人）是六要素之首，是整个流程的关键与核心。为确保结果的准确性，必须对实验室体系进行严格的质量管理，包括：人员需经系统培训并持证上岗；仪器设备需定期检定校准；实验耗材与试剂需严格管理；检测方法需经验证确认；实验室环境需分区管理以防交叉污染；所有操作步骤和数据记录必须规范。



讲者通过数据显示，不同检测人员的操作水平对结果影响巨大。在对低CT值（即病毒载量高）的样品进行检测时，不同人员的结果差异不大。然而，在处理高CT值（病毒载量低，通常≥35）的弱阳性样品时，人员间的结果差异变得非常显著，甚至同一个人对同一样品的两次重复检测，CT值差异都可能达到2-3个。这意味着对于弱毒株感染的样品，操作人员的微小差异就可能导致“阳性”被误判为“阴性”的严重后果。



为了对人员操作进行量化管理，讲者展示了通过质控图对不同人员的检测结果进行监控的实例。若某位人员的检测结果频繁超出控制线，则表明其操作存在失误。通过持续的培训和比对，其实验室要求检测人员的两次重复检测差值必须小于0.2，以确保结果的稳定性和重复性。





除了内部质控，参与由专业机构组织的实验室间能力比对也至关重要。这有助于发现实验室可能存在的系统性偏差、随机误差、污染或重复性差等问题，并据此对人员、仪器、试剂、环境和操作流程进行全面自查与优化。



为保证全流程的准确性，实验室在从样品采集到扩增的每一个环节都设置了相应的质量控制，如使用内参基因、标准物资、质控品以及试剂盒自带的阴阳性对照等，确保每一步操作都在监控之下。



在仪器质控方面，数据显示不同品牌的PCR扩增仪对同一样品的检测结果存在显著差异，CT值差异可达1-4个。ABI QuantStudio 5表现出最高的敏感性，优于其他型号及国产品牌。


相比之下，不同核酸提取仪器间的效率差异虽然也存在，但其对最终检测结果的影响相对较小。



2. 检测试剂盒的敏感性：决战弱阳性的关键

试剂盒是检测的“子弹”，其敏感性直接决定了能否发现弱毒株感染。讲者首先指出，不同核酸提取试剂盒的提取效率存在差异。然而，由于当前市场上许多提取仪器与试剂盒采取“闭环”配套模式，限制了用户自由比对和选择最优提取试剂的可能。



PCR扩增试剂盒的敏感性比对则更为关键。讲者团队对市面上多款试剂盒进行了测评，发现在检测CT值较低的强毒株样品时，大部分试剂盒表现尚可。但对于CT值高于33-35的弱阳性样品，不同试剂盒的表现则有天壤之别。

3. 样品类型的选择：因“毒”制宜，一场一策

讲者强调，不存在一种“万能”的采样方案，针对不同类型的ASF毒株，必须选择最合适的样品类型，才能最大化检出率。
对于早期基因缺失毒株：数据显示，咽拭子的检出率（84.6%）远高于口鼻拭子（46.15%），而尾根血的检出率则为0。



对于双基因缺失毒株：对比全血和咽拭子发现，全血的检出率（84.21%）高于咽拭子（68.42%）。更重要的是，存在31.58%的样品仅在全血中呈阳性，而15.79%的样品仅在咽拭子中呈阳性。因此，最终确定的最佳方案是“全血+咽拭子”复合采样，以避免漏检。



对于重组毒株：口鼻拭子的检出率达到了100%，而咽拭子为83.3%，尾根血和肛拭子的检出率均为0。因此，针对重组毒株，应以口鼻采样为绝对主导。



总结与展望

讲座最后，孔苗苗女士对分享内容进行了总结，提出了五点核心结论：
1. 非洲猪瘟毒株变化迅速，多样性与复杂性已超出过去的认知。2. 弱毒株感染早期临床表现不明显，无法依靠传统经验进行早期预警。3. I型/II型重组毒株排毒能力强，CT值变化快，当检测到CT值低于30时，往往已是晚期，早发现、早剔除是防控关键。4. 不同毒株需选择不同的采样方案，应做到“一场一策”，精准施策。5. 实验室是实现精准剔除的核心环节，而使用更高敏感性的试剂盒是其中重中之重。     



冠牧学习心得
采样策略必须动态调整：对于猪场兽医和管理者而言，必须摒弃“一套采样方案打天下”的旧观念。应根据本场及周边区域的流行非瘟毒株特点，灵活采用“咽拭子”（针对部分基因缺失株）、“全血+咽拭子”（针对双缺株）或“口鼻拭子”（针对重组株）等不同组合，真正做到“一场一策”。试剂盒选择是检测成败的生命线：实验室管理者不能仅凭说明书或常规样品来评判试剂盒。必须定期使用已知的高CT值临床弱阳性样本，对不同品牌的试剂盒进行实测“选美”，检出率是核心指标。选择一款能在高CT值区间稳定检出的高敏试剂盒，是防止弱毒株“隐形”传播的关键投资。人的因素是最大的质控变量：实验室主任应认识到，对于弱阳性样品，操作人员的稳定性是决定性因素。建议建立常态化的人员比对机制，特别是针对高CT值样本的重复性考核，设定如“重复管间CT差值<0.2”的明确标准，并对表现不佳的人员进行针对性强化培训。重新评估“阴性”结果的价值：面对间歇性排毒和试剂盒灵敏度差异，单次的阴性检测结果并不能完全排除感染。管理者在做决策时，应结合抗体检测、临床观察及采样策略的合理性进行综合判断，尤其是在处理来自高风险群体的样品时，对高CT值（如>35）的结果或可疑阴性结果需保持高度警惕。

知识的终点，是行动的开始

作为一场融合全球顶尖智慧的行业盛会，第二届“一带一路”国际生猪产业大会暨猪健康创新峰会为产业的创新发展注入了强劲动力。我们向大会主办方河南农业大学、欧洲猪健康管理学院（ECPHM）、牧原食品、一带一路国际生猪产业大会等单位致以诚挚的感谢 。感谢他们强强联合，为行业同仁搭建了如此高规格、国际化的交流平台，让前沿科技与创新实践得以交融碰撞。

大会为猪只健康管理指明了创新的方向，而我们的使命，就是将这些宝贵的行业智慧，转化为猪场内触手可及的精准诊断工具与解决方案。为了能持续获取未来行业盛会的前沿资讯，我们强烈推荐您关注“国际生猪产业大会”公众号。

同时，也请持续锁定“冠牧精准诊断”，让我们作为您身边的“兽医检测专家”，共同推动这些先进理念在一线落地生根，为中国养殖业的健康、可持续发展贡献力量！

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