问一下做生物的，关于knock in/out：更新，大家进来看看

junhuaq · 发表于 2009-8-11 15:45

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本帖最后由 junhuaq 于 2009-9-1 16:56 编辑

最近要做knock it/out，不是做老鼠，做MEF和HEF。
现在不知道knock的位置。
问下有没有比较general的knock in/out的kit啊。
不然自己设计HR，估计要挑死clone了。

延续上次的故事。
现在大概有点眉目。strategy也设计的差不多了，听听大家的意见，因为第一次做HR，没谱。
要targeting的是一段non-coding sequence，现在的计划是先用个gfp去target，然后再一起knock out。
因为最终的目的是要konck out这个sequence.
strategy中有一个荧光marker，一个positive marker，一个negative marker。其他实在没什么trap可以用了。不知道光这些是不是选择的效率已经可以接受了。
还有homology的两段arm一般多长就可以了？如果5kb的话，vector可能太大了。

matthiasB · 发表于 2009-8-11 16:27

本帖最后由 matthiasB 于 2009-8-11 16:46 编辑

我自己没作过不过我看到人家都用morpholino做的。呵呵。。。。不过这个好像knockdown

junhuaq · 发表于 2009-8-11 23:45

本帖最后由 junhuaq 于 2009-8-11 23:59 编辑

大姐，down和out两回事啊，偶knock out non-coding sequence。
继续求。。。

ys_zmm · 发表于 2009-8-12 00:55

不知道knock out的位置？至少有个概念大概要out什么基因吧？

catcindy · 发表于 2009-8-12 11:53

这个....不知道knockout的位置？那你要knockout什么啊？

junhuaq · 发表于 2009-8-12 14:27

就是现在不知道，真要做的时候肯定知道。老板出差了，叫我先找找有没有这样的kkit。
所以偶说找general的knock out/in的kit。

gummybearchen · 发表于 2009-8-12 15:00

你先把targeting vector建起来再说吧。你要knock什么东西都不知道，用什么系统knock也不知道，怎么做啊？这个没有kit的，knock out 和knck in 其实是一回事，其基本原理是同源重组……挑死克隆是正常的，500个能挑个一个阳性的算你运气……

junhuaq · 发表于 2009-8-12 16:55

挑死clone倒也不一定啊。找点好多trap还是有机会的。再不行就上zfn。所以想问下有没有类似的kit。
其实偶也觉得没有这样的kit的，要有就发财了。可是老板说去找找。

gummybearchen · 发表于 2009-8-12 17:30

最省力的的是看谁有现成的找人要。先查查你要做的别人有没有已经做出来或者正在做的。

junhuaq · 发表于 2009-8-12 17:41

这个肯定没有。

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