请问有人在用绿色或红色荧光蛋白吗

杉木脑袋 · 发表于 2011-12-12 14:45

马上注册，结交更多好友，享用更多功能，让你轻松玩转社区。

您需要登录才可以下载或查看，没有账号？注册

×

如果可以的话，能给我寄点过来吗？十分感谢！

pauliang · 发表于 2011-12-12 15:25

你是说你想要些eGFP的质粒吗？需要克隆在pGEM质粒（原核细胞中表达）还是pcDNA3（真核细胞中表达）中的？
最好把你的用途写清楚，这样别人也才好帮你，GFP之类的用途太广了。

杉木脑袋 · 发表于 2011-12-12 16:05

本帖最后由杉木脑袋于 2011-12-12 15:32 编辑

pauliang 发表于 2011-12-12 14:25
你是说你想要些eGFP的质粒吗？需要克隆在pGEM质粒（原核细胞中表达）还是pcDNA3（真核细胞中表达）中的？
...

恩，是这样的。我需要绿色荧光蛋白标记到大肠杆菌上，也就是说让受到标记的大肠杆菌发荧光，以便在显微镜下区分两种大肠杆菌。我不太了解这种状况下我需要哪种荧光蛋白。谢谢！

杉木脑袋 · 发表于 2011-12-12 19:54

或者有人知道哪一家公司卖的比较便宜吗？

pauliang · 发表于 2011-12-12 23:04

本帖最后由 pauliang 于 2011-12-12 22:05 编辑

杉木脑袋发表于 2011-12-12 15:05
恩，是这样的。我需要绿色荧光蛋白标记到大肠杆菌上，也就是说让受到标记的大肠杆菌发荧光，以便在显微 ...

你是只需要在大肠杆菌中表达GFP吗？如果是的话，就相对简单多了。

仅提供几套解决方案供参考，不负任何法律及连带责任。如无特殊说明，下文中的质粒均指适合在大肠杆菌内表达的质粒，且GFP，CFP或者BFP已克隆进质粒中。

方案一：直接去各家公司买。优点：省时省心；缺点：需印钞机，各家公司价钱不一。比如http://products.invitrogen.com/ivgn/product/V35320这里是320刀。
方案二：去Pubmed上搜相关的文章，找到有用你需要的质粒的文章，写信给作者要。一般情况下都会给你，但可能需要签material transfer agreement。优点：基本免费；缺点：费时，有做无用功的可能。
方案三：俺明天回实验室帮你看看我们实验室有没有。优点：免邮费，亲；缺点：你懂的...

pauliang · 发表于 2011-12-12 23:24

严肃认真的说，你是做你的本科，还是硕士或是博士课题？如果是本科或者硕士的话，找你老板帮你解决。博士的话这种事情只能自己解决了，当然还是要老板出钱买质粒的。

杉木脑袋 · 发表于 2011-12-13 10:31

pauliang 发表于 2011-12-12 22:24
严肃认真的说，你是做你的本科，还是硕士或是博士课题？如果是本科或者硕士的话，找你老板帮你解决。博士的 ...

谢谢你这么详细的解答，我现在在作博士课题。想先试着自己能不能解决。我也查了一下，价格相对来说也还贵的。

如果你们实验室有的话能寄给我那就太感谢了！

pauliang · 发表于 2011-12-14 14:05

不好意思，昨天没来得及帮你查。
我们实验室有适合在大肠杆菌内表达eGFP蛋白的空白质粒pGEX4T-1（http://www.gelifesciences.com/ap ... amp;zone=Proteomics），但你需要自己把eGFP克隆进去。我可以给你pCNDA3-eGFP，你需要做的是把eGFP从pCNDA3-eGFP质粒中切下来，再克隆进pGEX4T-1中就可以了。

如果你不是非常了解相关技术的话，还是建议你去pubmed上搜已克隆有eGFP的pGEX4T-1，然后找作者要。

pauliang · 发表于 2011-12-14 14:05

忘记问了，你在哪个学校？我上面说的质粒基本上你应该也能在你们学校内部找到。

杉木脑袋 · 发表于 2011-12-14 16:49

pauliang 发表于 2011-12-14 13:05
忘记问了，你在哪个学校？我上面说的质粒基本上你应该也能在你们学校内部找到。

我在德累斯顿工业大学。因为我对基因克隆方面不是很熟悉，所以最好是有现成的gfp可以用，我先去看看你提到的关于克隆的文献，看看在我们实验室能做不。到时再跟你联系。十分感谢的你帮忙啊!

杉木脑袋 · 发表于 2011-12-14 16:53

pauliang 发表于 2011-12-14 13:05
不好意思，昨天没来得及帮你查。
我们实验室有适合在大肠杆菌内表达eGFP蛋白的空白质粒pGEX4T-1（http://w ...

不好意思，我有一点不清楚的是，pCNDA3-eGFP是绿色荧光蛋白质粒吗？可以直接把它导入细菌内吗？

我对分子生物方面比较陌生，之前一直是做生理的。。。。。。。。

pauliang · 发表于 2011-12-15 22:31

pCNDA3-eGFP是绿色荧光蛋白质粒，但只适合在哺乳动物细胞内表达。

neuron · 发表于 2011-12-15 22:39

本帖最后由 neuron 于 2011-12-15 21:41 编辑

杉木脑袋发表于 2011-12-14 15:53
不好意思，我有一点不清楚的是，pCNDA3-eGFP是绿色荧光蛋白质粒吗？可以直接把它导入细菌内吗？

我对分 ...

http://www.aiaibaier.com/upload/ ... 12_pcdna3.1_man.pdf
你可以自己看一下，CMV promoter只能用在哺乳动物宿主里面表达

如果你附近有微生物的组，去问问他们。这样省得你自己做subcloning了

杉木脑袋 · 发表于 2011-12-16 13:59

pauliang 发表于 2011-12-15 21:31
pCNDA3-eGFP是绿色荧光蛋白质粒，但只适合在哺乳动物细胞内表达。

恩，谢谢解答。如果方便的话能否把pGEX4T-1，pCNDA3-eGFP邮寄给我呢。地址我私信给你。

cheerhong · 发表于 2011-12-17 14:35

TUD的，你是再BIOTEC吗，你直接联系下本校生物系的组吧，我觉得每个组都有……

账号		自动登录	找回密码
密码			注册

萍聚头条

[求助] 请问有人在用绿色或红色荧光蛋白吗

马上注册，结交更多好友，享用更多功能，让你轻松玩转社区。

浏览过的版块