The 2007 Nobel Prize in Physiology or Medicine

neuron

原帖由 junhuaq 于 2007-10-8 23:44 发表
还没看那篇nature的文章。不知道HR在mammals上的效率高不高。
用cre/loxp，如果是定点的话，第一步还是得靠HR。
感觉这个技术不算太高深啊，居然得了nobel prize。先汗一个。估计这话要挨拍了。
ls的几位翻译 ...

同源重组效率在哺乳动物里面效率不高。。。毕竟不是低等的酵母。。。
所以要有markers 来帮助大规模的筛选

利用胚胎干细胞也是一个重大的发现哦
毕竟现在只有小鼠的胚胎干细胞系，所以只有小鼠的knock out

stubor

这贴我喜欢。长知识的。大家继续。$支持$

junhuaq

今天跟实验室的印度小m聊了聊,她做的跟这个得奖的基本就是一样的.问了下那篇文章，人家说是80年代末的， 刚看下，果然。
HR总得用marker筛选的.用marker也有很多trap的.用的好，效率高很多.
要定位KO或者KI, 不知道除了HR还有什么方法没?偶做的虽然也说是定位，但第一步还是随机的.

neuron

原帖由 junhuaq 于 2007-10-9 12:46 发表
今天跟实验室的印度小m聊了聊,她做的跟这个得奖的基本就是一样的.问了下那篇文章，人家说是80年代末的， 刚看下，果然。
HR总得用marker筛选的.用marker也有很多trap的.用的好，效率高很多.
要定位KO或者KI,  ...

knockout是有很多tricks
cell type-specific gene ablation...conditioned knockout

我了解的同源重组markers,一般用个一个neo加一个tk

不明白为什么你说同源重组是随机的
哺乳动物同源重组效率不高
但是没有同源序列,也没办法同源重组啊

junhuaq

ls的，偶说的做定位不是用HR，但是也叫site-specific integration,但是第一步是随即的。不是象HR那样第一步就定位了的。
KO和KI都是需要有selection的trick的。neo和tk，一个positive selection,一个是negative selection，其实negective的选择效果并不好，但是没有后续蛋白处理的麻烦。一半hygromycin也用来做positive selection。还有ATG trap等方法。还可以用荧光蛋白，FACS sorting。
mammals也要看什么细胞，不同的细胞系，估计对于HR的效率差别不小。
KO也可以用tet-on tet-off代替吧。干妈非要把他给KO呢。;)

neuron

原帖由 junhuaq 于 2007-10-9 21:28 发表
ls的，偶说的做定位不是用HR，但是也叫site-specific integration,但是第一步是随即的。不是象HR那样第一步就定位了的。
KO和KI都是需要有selection的trick的。neo和tk，一个positive selection,一个是negativ ...

要用tet的系统得在细胞里面另外表达Tet
细胞系里面这个好办到,整个动物水平的....我不知道....